产品货号：
KL2405042
中文名称：
2×探针法RT-qPCR MasterMix(大肠杆菌专用)
英文名称：
2×E.coli Probe qRT-PCR MasterMix
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
用户自备：
RNA模板、引物、TaqMan探针、超纯水。
使用方法：
相关搜索：2×探针法RT-qPCR MasterMix(大肠杆菌专用)，2×E.coli Probe qRT-PCR MasterMix
本制品是专门用于检测大肠杆菌基因的探针法qRT-PCR Master Mix。目前大多数Taq DNA聚合酶都是从大肠杆菌中表达并提取，因此不可避免地污染有痕量的大肠杆菌基因组DNA，在空白样本或模板浓度很低的样本中，大肠杆菌专一的引物和探针可能会识别Taq DNA聚合酶带来的痕量的大肠杆菌基因组DNA，产生假阳性。为了克服此棘手问题，本公司开发了本制品。
产品特点：
- 用特殊工艺除去了Taq DNA聚合酶中痕量大肠杆菌DNA污染，在扩增大肠杆菌样本时不会出现假阳性。
- 以2×Mix提供，用户只需准备模板、引物、探针和ROX染料（取决于qPCR仪器）即可以进行探针法实时定量RT-PCR实验，非常方便快捷，降低了操作误差。
- 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。灵敏度最高时可以达到50拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。
- 既可用于TaqMan探针qRT-PCR，也可以是分子信标探针qRT-PCR。
- 灵敏度和专一性比染料法荧光定量RT-PCR更高。
- 既可用于定性实验，也可以用于定量检测。用于定量时线性范围至少为5个数量级。
- 可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。
- 本制品足够50次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 大肠杆菌专用探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 大肠杆菌专用探针法qRT-PCR酶混合液 | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
用户自备：
RNA模板、引物、TaqMan探针、超纯水。
使用方法：
- 如果有N个样品并且做定量分析，最好设置N+7个反应，多出的7个中，6个是做标准曲线的阳性对照，一个是阴性对照(NC)。在N+7个PCR管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则6个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照(PC)，用户自己需要根据下表进行适当修改（把6个标曲反应改成1个阳性对照反应）。
成分 N个样品管 6个标准曲线管 NC管 大肠杆菌专用探针法qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 10μL 大肠杆菌专用探针法qRT-PCR酶混合液 1μL 1μL 1μL 自备引物1(10μM) 各0.8μL 各0.8μL 0.8μL 自备引物2(10μM) 各0.8μL 各0.8μL 0.8μL 自备探针(10μM) 各0.4μL 各0.4μL 0.4μL N个自备模板RNA 各1～2μL 不加 不加 自备阳性对照模板(6个梯度) 不加 各1μL(1管加1个梯度) 不加 阴性对照模板(水) 不加 不加 1μL 自备ROX 各0.4μL/- 各0.4μL/- 0.4μL/- 超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 不需要ROX的机型：AgilentMX3000和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System等型号的荧光PCR仪器不需要加ROX染料，但加入的话也不会影响整个PCR分析
- 需要使用ROX I的机型：ABIPrism7000、7300、7700、7900HT、Step One、Step One Plus。
- 需要使用ROX II的机型：ABIPrism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、CorbettRotorGene3000。
- 不需要ROX的机型：AgilentMX3000和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System等型号的荧光PCR仪器不需要加ROX染料，但加入的话也不会影响整个PCR分析
- 放入荧光PCR仪中进行扩增下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分2.子长度，引物和探针的Tm值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法PCR：盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：
- 两步法RT-PCR程序：
步骤 温度 时间 逆转录 50℃ 10min 预变性 94℃ 2min PCR反应
（35～45个循环）94℃ 15sec 60℃ 45～60sec（采集FAM通道的荧光信号，
淬灭基团为TAMRA） - 三步法RT-PCR程序：
步骤 温度 时间 逆转录 50℃ 10min 预变性 94℃ 2min PCR反应
（35～45个循环）94℃ 15sec 55～65℃ 15sec 72℃ 30sec（采集FAM通道的荧光信号，
淬灭基团为TAMRA）
- 两步法RT-PCR程序：
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照Ct大于或等于40（阈值需要以阴性对照的Ct值确定，此处为便于叙述以40为例，具体情况很可能阈值不一样）。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于40。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于40则为阳性。
相关搜索：2×探针法RT-qPCR MasterMix(大肠杆菌专用)，2×E.coli Probe qRT-PCR MasterMix